デジカメWatchの発表記事は、D300SをD300の上位機種とし、APS-Cサイズの撮像素子を採用するニコンDXフォーマット機のフラッグシップと位置付けた。同じ記事の仕様比較表でも、連写約4.5コマ/秒のD90より上のセグメントに置かれている。^{1プレス デジカメWatchニコン、動画記録/編集機能を搭載した「D300S」}公式サイトのキャッチコピーは「プロフェッショナルを魅了する機動力。」である。^{3公式 ニコンイメージングジャパンD300S 概要}

この位置付けは、1年後にD7000が登場しても変わらなかった。2010年9月のD7000の発表時、デジカメWatchはD300SがDXフォーマットのフラッグシップであることに変更はないと明記し、D7000をD300SとD90の中間に位置する"ハイミドル"機とした。^{4プレス デジカメWatchニコン、防塵防滴・視野率約100％のデジタル一眼レフ「D7000」}ITmediaの発表記事も、D7000の新しいシャッターユニットが備えるシャッタースピード1/8000〜30秒とレリーズ15万回の耐久性を「D300S同等の能力」と表現し、D300Sを基準に据えている。^{5プレス ITmedia「挑発的なまでのパフォーマンス」――ニコン「D7000」登場}

D300Sの後を継ぐDXフォーマットの最上位機は、その後長く現れなかった。2016年1月にD500が発表された際、デジカメWatchはD500を、2009年発売のD300S以降「長らくその座を開けていた」金属ボディのDXフォーマット最上位モデルと紹介した。記事はさらに、D3に対するD300のような関係がD5とD500の間にもあると説明している。^{6プレス デジカメWatchニコン、DXフォーマット最上位モデル「D500」}

D300からの主な変更点は、動画記録機能「Dムービー」の搭載、連写速度の毎秒6コマから7コマへの高速化、CFとSDHC/SDのダブルスロット化の三つである。操作面ではinfoボタンとライブビュー専用ボタンが加わり、静音撮影モード、簡易動画編集機能、外部ステレオマイクへの対応も新たに備えた。バッテリーはEN-EL3eで、バッテリーグリップMB-D10を含めてD300との互換性が保たれた。^{1プレス デジカメWatchニコン、動画記録/編集機能を搭載した「D300S」}

動画は1,280×720ピクセル（最長5分）、640×424ピクセル、320×216ピクセルの3サイズを、AVI形式で記録する。^{7公式 ニコンイメージングジャパンD300S 主な仕様}撮影中はコントラスト検出AFでピントを合わせられるが、合焦が速くない点は発売時の専門媒体がそろって指摘した。記録中は画面の一部を拡大表示することもできない。^{8レビュー デジカメWatch【新製品レビュー】ニコンD300S}

発売時の専門媒体は、D300からの改良を総じて小幅なものと受け止めた。dpreviewは「穏やかな改良」と表現している。^{9レビュー Digital Photography ReviewNikon D300S Review}デジカメWatchのレビューも、高感度のノイズはD300よりわずかに少ない程度で、D300の利用者が買い替えるほどの劇的な変化はないと結論づけた。^{8レビュー デジカメWatch【新製品レビュー】ニコンD300S}

dpreviewは、D300Sの新たな競合としてキヤノンEOS 7DとペンタックスK-7を挙げた。^{9レビュー Digital Photography ReviewNikon D300S Review}このうちEOS 7Dは10月2日に発売され、有効約1,800万画素、19点クロスAF、約8コマ/秒の連写、1,920×1,080ピクセルのフルHD動画を備えながら、店頭予想価格はボディのみで19万円前後だった。1,230万画素、51点AF、約7コマ/秒、720pの動画で22万円前後のD300Sに対し、EOS 7Dは画素数、連写速度、動画の解像度で上回り、価格は安かった。^{2プレス デジカメWatchキヤノン、ファインダー視野率100％のAPS-C最上位機種「EOS 7D」}

価格.comのレビューは、2026年9月28日時点で228件、総合評価は4.75点である。クチコミの投稿数も13,618件にのぼる。発売から長い年月が経った今も、AFと連写性能は通用するという評価が複数のレビューに見られる。一方で、現代の基準では1,230万画素という画素数や、ISO800あたりからの高感度画質が見劣りするという指摘がある。重量と大きさによる携帯性の低さも、不満点に挙がっている。^{10レビュー 価格.comニコン D300S ボディ レビュー評価・評判}